3、细菌检测包括对弧菌数量的测定及其优势菌种类的鉴定,以下为弧菌总数标准化检测程序及评分标准:
(1)弧菌总数标准化检测程序
①样本处理:
将初样(混合样)放入初样管中,用无菌扦样器捣碎样本制成实验样本。
②母液及稀释液的制备:
用扦样器扦取0.5g(0.5ml)实验样本于母液管(内含4.5ml Nacl溶液)中,制成母液,并振荡混匀,此时母液管浓度级别为10-1。
用微量移液器吸取母液管中的液体0.5ml,注入A管(内含4.5ml Nacl溶液)配成浓度级别为10-2的稀释液,并振荡混匀。
以此类推,制成B管10-3稀释液和C管10-4的稀释液。
③细菌接种及培养:
用无菌微量移液器分别吸取ABC管中的稀释液,向特定选择性培养基TCBS上滴1滴溶液(0.05ml),并做平行对照组,微微摇晃使液体尽量散开,待液体完全被培养及吸收后,放于25-28℃倒置培养36-48小时后取出计数。
④细菌总数计数及计算均值
无论细菌菌落大小均要求计数,经计算得每个浓度的计数平均值分别用ABC来表示。
⑤结果判定原则:
a、首先选择平均菌落在20~200之间的数值作为检测结果,如果只有一项数值介于20~200之间,则选择该数值为最终结果,即若A属于[20,200],BC不属于[20,200],则A为最终结果;
b、如果有两项数值介于20~200之间,则按以下原则:
AB属于[20~200],C小于20,则选B为最终结果;
BC属于[20,200],A大于200,则选C为最终结果。
c、如果ABC均大于200,则选C为最终结果,如果ABC均小于20,则选A为最终结果。
d、可以接受的结果:
如果AB大于200,C小于20或A大于200,BC小于20,此两种结果可由多种原因导致,需比较实验组和对照平行组来判定是否属于上述几种情况,如果认为结果不能更改,则可选择B为最终结果,B为可接受结果。
e、如果除了上述的这些情况外,还出现了其它的结果,则说明实验过程中存在严重的错误,应当重新实验。
(2)评分标准:
①弧菌总数计数的最终结果若选择A为最终检测结果的记为1;
②弧菌总数计数的最终结果若选择B为最终检测结果的记为2;
③弧菌总数计数的最终结果若选择C为最终检测结果的记为4;
三、安全等级的划分
安全等级分成五个等级,具体如下:
综合安全等级评分表
安全等级
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安全
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比较安全
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一般安全
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比较危险
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危险
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综合评分
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3、4
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5、6
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7、8
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9、10
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12 |
四、等级提升及等级提升原则
1、等级提升原理及概念:
由于不同致病性细菌或寄生虫对不同生物体造成的危害程度不同,所以每类生物体都有其专属的致病性细菌或寄生虫病,为了更好地体现这种差异性,也为了更准确地出具综合安全等级评价结果,于是引入等级提升的概念:在细菌检测或寄生虫检测中,如果处于优势生长的细菌或寄生虫,恰好为该品种主要细菌病或寄生虫病中的致病性细菌或寄生虫,则需进行等级提升。
2、等级提升原则:
①范围及条件:当细菌检测和寄生虫检测中的最终判定结果最高级,即评分为4的时候,并且所鉴定的优势菌(种)种类为该样本所列的致病性病源菌(种),则需进行等级提升;
②系统等级提升:在系统综合评分后,将系统的综合安全等级向危险等级方向提升一个等级,即如果系统综合评分为7,系统综合安全等级为一般安全等级,则经过提升后,系统综合安全等级为比较危险等级。